本文研究的主要作者是Xinjing Wang和Bilan Li，其所属机构为上海第一妇婴保健院、同济大学医学院妇产科系。该研究发表于期刊《Oncotargets and Therapy》，发布时间为2017年，文中DOI为：http://dx.doi.org/10.2147/ott.s130022。
本文的研究领域主要集中在妇科肿瘤学，尤其是子宫内膜癌（endometrial carcinoma，EC）。子宫内膜癌是女性生殖道中最常见的恶性肿瘤之一，每年全球新发病例达18.9万，死亡人数约为4.5万。对于晚期和复发性子宫内膜癌的患者，预后往往较差。尽管放疗和激素疗法可作为晚期或复发性病例的辅助治疗，现有的治疗效果仍有限，其分子病理机制尚未完全明确。
近年来，DNA启动子区域高甲基化作为一种关键的表观遗传调控机制，在肿瘤发生过程中引起了广泛关注。这种机制通过抑制某些肿瘤抑制基因的转录，促进细胞周期异常及抗凋亡功能，从而促进癌症发生。DNA甲基化由DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）调节，DNMT1作为关键的DNA甲基转移酶之一，在维持DNA甲基化模式和抑制肿瘤抑制基因转录中具有重要作用。
然而，目前关于DNMT1在子宫内膜癌中的作用研究尚不充分。因此，本研究旨在探讨DNMT1通过调控细胞周期及凋亡相关蛋白表达对子宫内膜癌细胞的影响，这为进一步开发以DNMT1为靶点的子宫内膜癌新疗法提供理论依据。
本研究的流程可分为以下几部分：
本研究中，采用了四种子宫内膜癌细胞系：HEC-1B、KLE、Ishikawa和AN3CA，这些细胞均购自中国科学院。细胞培养采用高糖DMEM/F12培养基，补充10%胎牛血清（FBS）。
研究通过小干扰RNA（siRNA）技术下调DNMT1表达，使用Lipofectamine 2000转染试剂进行转染实验，而对照组使用了无关序列的siRNA。
利用TRIzol试剂提取总RNA，之后反转录为cDNA，并采用SYBR Premix Ex Taq进行实时定量PCR（qPCR）。研究中使用的关键基因引物包括：NF-κBIA（核因子κB抑制因子α）、Bax（与Bcl-2相关的x蛋白）、Bcl-2（B细胞淋巴瘤-2基因）及CCND1/2（细胞周期素D1/D2）。
研究提取了细胞总蛋白，采用Bio-Rad蛋白检测试剂盒定量后，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，并将蛋白转移至PVDF膜。接着，分别与针对DNMT1、Bax、Bcl-2等特异抗体孵育，通过化学发光检测蛋白信号。
采用CCK-8（细胞计数试剂盒）法，每孔接种103个细胞，培养后分别于450 nm处测定光密度（OD值），以评估不同处理组细胞的增殖能力。
利用流式细胞术检测siRNA处理对细胞周期及凋亡的影响。细胞通过PI染色法进行周期分布分析，并使用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测凋亡比例。
qPCR和Western Blot数据显示，DNMT1的表达在低分化子宫内膜癌细胞系（AN3CA和HEC-1B）中显著高于高分化细胞系（KLE和Ishikawa）。转染DNMT1 siRNA后，AN3CA和HEC-1B细胞的DNMT1表达水平显著降低，与对照组相比有统计学意义（P < 0.01）。
通过CCK-8检测发现，转染DNMT1 siRNA后，AN3CA和HEC-1B细胞的增殖能力明显降低（P < 0.01），表明DNMT1促进了子宫内膜癌细胞增殖。
细胞周期检测显示，DNMT1降解后，G0/G1期细胞比例显著升高，S期细胞比例减小。这提示DNMT1可能通过调控细胞周期相关基因，例如CCND1/2，促进细胞增殖。
通过流式细胞术发现，与对照组相比，DNMT1 siRNA组的子宫内膜癌细胞早期凋亡率显著增加，凋亡比例从2.66%增强至4.93%（P < 0.05）。
qPCR及Western Blot显示，DNMT1 siRNA组的NF-κBIA和Bax表达显著上调，而Bcl-2及CCND1/2显著下调。这一结果表明，DNMT1可能通过调控这些蛋白改变细胞周期和凋亡机制。
该研究首次证实，DNMT1在侵袭性且低分化的子宫内膜癌细胞中异常高表达。DNMT1通过上调CCND1/2、下调Bax/Bcl-2比率，作为细胞增殖的积极调节因子并抑制凋亡。
阻断DNMT1的功能显著抑制了子宫内膜癌细胞的增殖，并引起细胞周期阻滞及凋亡。这一发现进一步证明了DNMT1在子宫内膜癌发生和发展的关键作用，并提示其可能成为一种潜在的治疗靶点。
未来，需在体内动物模型中验证DNMT1靶向治疗的有效性，并开展相关临床研究。这将帮助确定DNMT1抑制剂在子宫内膜癌治疗中的实际应用潜力，同时也可拓宽表观遗传学在癌症治疗中的开发思路。