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基于纳米压痕法测定人体眼表模量和水力传导率的简单基础

期刊:Acta BiomaterialiaDOI:10.1016/j.actbio.2016.12.007

类型a

主要作者、研究机构及发表信息
这篇研究由M.V. Swain(通讯作者,来自科威特大学牙科学院生物临床科学系)、J. Nohava(安东帕公司,瑞士)和P. Eberwein(德国弗赖堡大学眼科中心)共同完成。研究发表于《Acta Biomaterialia》期刊,2017年第50卷,页码312-321。

学术背景与研究动机
该研究属于生物材料力学领域,特别是针对人眼组织的力学性质的研究。眼睛表面在日常生活中起着至关重要的作用,它不仅保证了角膜的透明性和泪膜的结构完整性,还为微生物感染提供了屏障。此外,眼部组织的微小尺度生物力学特性对组织稳态至关重要,尤其是在角膜缘区域(limbus),这一区域包含成体角膜上皮干细胞的特殊生态位,对角膜上皮再生具有重要作用。然而,由于疾病或事故(如热烧伤或化学烧伤)破坏这种生态位时,需要使用定制的生物材料进行重建。这促使研究人员测量健康人眼表面(包括巩膜、角膜缘和角膜基质)的弹性模量,并探索一种简单模型来描述流体填充组织的接触加载行为。研究的目标是通过纳米压痕技术测定人眼组织的有效弹性模量和水力传导率(渗透性),并提出一种基于达西定律(Darcy’s law)的简化分析方法。

研究流程与实验设计
本研究分为多个步骤,详细如下:

  1. 样本准备
    实验使用的角膜样本来源于巴登-符腾堡狮子角膜库,所有捐赠者或其亲属均签署了知情同意书,且研究获得了德国弗赖堡大学伦理委员会的批准(投票号408/15)。实验共测试了11个健康对照组的角膜样本,这些样本因内皮细胞计数低而被排除用于患者移植。实验前,角膜样本在含6%右旋糖酐的培养基中平衡,中央角膜厚度约为700微米,表明角膜显著肿胀。

  2. 纳米压痕实验
    使用安东帕公司的Bioindenter纳米压痕系统进行实验,压头为半径500微米的红宝石球形压头。实验包括以下内容:

    • 对不同区域(角膜基质、角膜缘和巩膜)进行压痕测试,最大载荷范围为20至30微牛顿,部分实验使用200微牛顿的最大载荷,保持时间为60至180秒后卸载。
    • 测试速率分别为40微牛顿/分钟(加载)和100微牛顿/分钟(卸载),样品完全浸没在液体培养基中。
    • 针对角膜组织进行了三种加载速率(200、400和1200微牛顿/分钟)的测试,保持时间为60秒。
    • 在实验前,用手术刀完全去除角膜上皮,并将角膜巩膜纽扣切成四份,轻轻展平并粘附到平坦表面上以形成几乎平坦的测试面。
  3. 数据分析
    数据分析基于赫兹接触力学和达西定律,具体包括以下步骤:

    • 使用赫兹方程拟合加载曲线,计算有效弹性模量(E*)。
    • 基于达西定律推导出液压传导率(k),并通过实验数据中的加载、蠕变和卸载响应进行验证。
    • 提出了一个简化的多孔弹性模型,结合弹性模量和液压传导率,用于描述组织的行为。

主要结果
1. 弹性模量(E*)的测定
通过对加载曲线的拟合,研究得到了不同组织的有效弹性模量(E*)。结果显示,角膜基质和巩膜的弹性模量相似(分别为19.2 ± 3.1 kPa和17.0 ± 4.5 kPa),而角膜缘的弹性模量显著较低(10.4 ± 4.4 kPa)。对于角膜组织,在三种加载速率下测得的弹性模量分别为51.9 ± 3.1 kPa(1200微牛顿/分钟)、36.5 ± 1.8 kPa(400微牛顿/分钟)和22.6 ± 1.8 kPa(200微牛顿/分钟)。

  1. 液压传导率(k)的测定
    基于达西定律,研究计算了不同组织的液压传导率(k)。角膜基质和巩膜的k值相近(分别为4.98 ± 1.66 × 10⁻¹⁴ m⁴/s和6.04 ± 2.01 × 10⁻¹⁴ m⁴/s),而角膜缘的k值显著较高(1.74 ± 0.51 × 10⁻¹³ m⁴/s)。对于角膜组织,在三种加载速率下的k值分别为1.41 ± 0.37 × 10⁻¹³ m⁴/s(1200微牛顿/分钟)、9.91 ± 1.98 × 10⁻¹⁴ m⁴/s(400微牛顿/分钟)和9.95 ± 4.67 × 10⁻¹⁴ m⁴/s(200微牛顿/分钟)。

  2. 蠕变行为的分析
    研究发现,在最大载荷下,组织表现出显著的蠕变行为。蠕变速率随压入深度增加而下降,且与加载速率密切相关。卸载过程中,部分组织表现出一定程度的恢复,表明其具有多孔弹性行为。

  3. 多孔弹性模型的验证
    研究提出的多孔弹性模型能够很好地解释实验数据,特别是在结合弹性模量和液压传导率的情况下。模型预测的结果与实验观察一致,表明该模型适用于描述流体填充组织的力学行为。

结论与意义
本研究提出了一种基于达西定律的简化分析方法,用于测定流体填充组织的有效弹性模量和液压传导率。该方法不仅适用于眼部组织,还可推广到其他生物材料的研究。研究结果表明,角膜基质和巩膜的力学性质相似,而角膜缘的弹性模量较低但液压传导率较高。这一发现对理解眼部组织的力学行为及其在疾病和治疗中的变化具有重要意义。此外,该方法为生物材料力学领域的研究提供了一种简便且有效的工具,有助于推动组织工程和生物医学应用的发展。

研究亮点
1. 提出了一种基于达西定律的简化分析方法,能够同时测定组织的有效弹性模量和液压传导率。
2. 揭示了角膜基质、角膜缘和巩膜在力学性质上的差异,特别是角膜缘的高液压传导率。
3. 验证了多孔弹性模型在描述流体填充组织力学行为中的适用性。
4. 实验设计简单高效,适合在多种生物材料中推广应用。

其他有价值的内容
研究还讨论了实验中的局限性,例如纳米压痕系统的漂移问题以及表面层部分去除对实验结果的影响。此外,研究指出,当前方法可以作为更复杂多孔弹性模型的补充,为未来研究提供了方向。

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