学术研究报告：OTULIN在电针治疗急性缺血性中风中的作用
一、研究作者与发表信息
本研究由Hongbei Xu、You Wang和Yong Luo共同完成，研究团队分别来自贵州医科大学附属医院神经内科、重庆医科大学第一附属医院神经内科和实验室研究中心。研究于2021年发表在期刊*Molecular Medicine*上，题为“OTULIN is a new target of EA treatment in the alleviation of brain injury and glial cell activation via suppression of the NF-κB signalling pathway in acute ischaemic stroke rats”。
二、学术背景
急性缺血性中风是全球范围内导致死亡和残疾的主要原因之一。其病理机制涉及脑缺血后引发的炎症反应，尤其是核因子κB（NF-κB）信号通路的过度激活。NF-κB在脑缺血后的神经元损伤和神经炎症中起关键作用。电针（Electroacupuncture, EA）作为一种传统中医疗法，已被证明能够通过抑制NF-κB信号通路减轻脑损伤和神经炎症，但其具体机制尚不明确。
OTULIN（Ovarian Tumor Domain Deubiquitinase with Linear Linkage Specificity）是一种新发现的去泛素化酶，能够特异性地水解线性泛素链，并在NF-κB信号通路中发挥负调控作用。研究表明，OTULIN在肝脏炎症和癌症中具有保护作用，但其在中枢神经系统（CNS）中的作用尚未完全阐明。本研究旨在探讨OTULIN是否在电针治疗急性缺血性中风过程中发挥关键作用，并揭示其通过调控NF-κB信号通路减轻脑损伤和神经炎症的机制。
三、研究流程
本研究分为多个步骤，详细流程如下：
动物模型建立
研究使用Sprague-Dawley（SD）大鼠，通过短暂性大脑中动脉闭塞（Transient Middle Cerebral Artery Occlusion, tMCAO）手术建立急性缺血性中风模型。手术过程中，使用激光多普勒血流仪监测脑血流，确保模型成功。
电针治疗
电针治疗在“百会”（GV 20）、“合谷”（LI 4）和“太冲”（LR 3）穴位进行，每天一次，持续7天。电针参数设置为1 mA强度，2/20 Hz频率，每次30分钟。
OTULIN基因沉默
通过脑室内注射携带OTULIN沉默序列的慢病毒（LV-shOTULIN）或对照病毒（LV-Scramble），验证OTULIN在电针治疗中的作用。
神经行为学评估
在再灌注后72小时，采用改良神经功能缺损评分（Modified Neurological Severity Score, mNSS）、旋转棒测试（Rotarod Test）和倾斜板测试（Inclined Board Test）评估大鼠的神经功能。
脑梗死体积检测
使用2,3,5-三苯基四氮唑（TTC）染色法检测脑梗死体积，并通过图像分析软件计算梗死面积。
神经元损伤检测
通过尼氏染色（Nissl Staining）和TUNEL染色观察缺血半影区神经元的形态和凋亡情况。
NF-κB信号通路检测
使用Western blotting和免疫组化技术检测OTULIN、磷酸化IκBα（p-IκBα）、IκBα、细胞质和细胞核NF-κB p65蛋白的表达水平，分析NF-κB信号通路的激活情况。
神经炎症检测
通过免疫荧光染色观察小胶质细胞（Iba-1标记）和星形胶质细胞（GFAP标记）的活化状态，并使用ELISA检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。
四、主要结果
1. 电针增强OTULIN表达
电针治疗后，缺血半影区OTULIN的mRNA和蛋白表达显著增加，且在再灌注后48小时达到峰值。免疫荧光染色显示，OTULIN主要表达于神经元，少量表达于小胶质细胞。
OTULIN基因沉默逆转电针的神经保护作用
OTULIN沉默后，电针改善神经功能、减少脑梗死体积和神经元损伤的作用被显著削弱。
电针抑制NF-κB信号通路
电针显著降低了IκBα的磷酸化水平和NF-κB p65的核转位，而OTULIN沉默则逆转了这一作用。
电针抑制神经炎症
电针减少了小胶质细胞和星形胶质细胞的活化，并降低了TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平。OTULIN沉默后，这些抑制作用被显著削弱。
五、结论
本研究发现，OTULIN在电针治疗急性缺血性中风过程中发挥关键作用。电针通过增强OTULIN表达，抑制NF-κB信号通路，从而减轻脑损伤和神经炎症。这一研究为OTULIN作为治疗缺血性中风的新靶点提供了实验依据，并揭示了电针治疗中风的分子机制。
六、研究亮点
1. 重要发现：首次证明OTULIN在电针治疗急性缺血性中风中的关键作用。
2. 方法创新：结合基因沉默技术和电针治疗，深入探讨OTULIN的神经保护机制。
3. 科学价值：为缺血性中风的治疗提供了新的分子靶点和理论依据。
七、其他有价值内容
本研究还发现，OTULIN的神经保护作用可能涉及多种细胞的参与和协调，这为进一步研究OTULIN在神经系统中的功能提供了方向。