本研究由来自中国多个研究机构的科研团队共同完成，主要作者包括Min Jiang、Aiping Wang、Yaning Sun、Yuan Li、Yumei Chen、Jingming Zhou、Hongliang Liu、Peiyang Ding、Yanhua Qi、Ning Li和Gaiping Zhang。研究团队来自郑州大学、河南农业大学、北京大学、兰州大学等机构，研究得到了河南省免疫生物学重点实验室的支持。该研究于2023年7月19日发表在《Microbiology Spectrum》期刊上，题为《Development of a Gold Nanoparticle-Based Immunochromatographic Strip for Rapid Detection of Porcine Circovirus Type 2》。
猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2, PCV2）是全球养猪业中一种重要的病原体，能够引发猪圆环病毒相关疾病（PCVAD），导致严重的经济损失。PCV2的衣壳蛋白（Cap蛋白）是病毒的唯一结构蛋白，也是主要的免疫原性蛋白。目前，PCV2疫苗的研究和生产依赖于对病毒颗粒或Cap蛋白的检测。然而，传统的检测方法如Western Blot（WB）、间接免疫荧光（IFA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等，虽然准确，但操作复杂、耗时长、成本高。因此，开发一种快速、简便、可靠的检测方法对于PCV2疫苗研究具有重要意义。
本研究旨在开发一种基于金纳米颗粒（Gold Nanoparticle, AuNP）的免疫层析试纸条，用于快速检测PCV2病毒颗粒或Cap蛋白。研究流程主要包括以下几个步骤：
单克隆抗体的制备与筛选
研究首先通过免疫小鼠制备了针对PCV2的单克隆抗体（mAbs），并通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）筛选出6种特异性较高的单克隆抗体（3B6、3G8、3G11、6A4、7D12和12E8）。这些抗体能够识别PCV2的Cap蛋白，其中12E8、3G11和6A4表现出较高的反应活性。通过Western Blot进一步验证，发现3B6、3G8、3G11和6A4识别线性表位，而7D12和12E8可能识别构象表位。
抗体对的筛选与优化
研究团队通过点条试验筛选出最佳的抗体对（12E8和3G8-AuNPs），用于后续试纸条的制备。该抗体对在检测PCV2时表现出最强的反应性。
金纳米颗粒的制备与表征
金纳米颗粒通过柠檬酸钠还原法制备，并通过透射电子显微镜（TEM）和动态光散射（DLS）进行表征。研究确定了3G8抗体与金纳米颗粒的最佳结合浓度，并验证了其稳定性。
免疫层析试纸条的制备与性能评估
试纸条由样品垫、结合垫（含金纳米颗粒标记的抗体）、检测膜（含检测线和控制线）和吸收垫组成。研究通过一系列实验评估了试纸条的灵敏度、特异性、重复性和稳定性。结果表明，试纸条对PCV2的检测限为10^3.18 TCID50/mL，对PCV2 Cap蛋白的检测限为2.03 mg/mL，且无与其他猪病毒（如PCV1、PCV3、PRRSV等）的交叉反应。试纸条在室温干燥状态下可稳定保存12个月，检测结果可在5分钟内通过肉眼观察获得。
灵敏度
试纸条对PCV2病毒颗粒的检测限为10^3.18 TCID50/mL，对PCV2 Cap蛋白的检测限为2.03 mg/mL，比传统的Western Blot方法灵敏度高出8倍。
特异性
试纸条对PCV2具有高度特异性，未观察到与PCV1、PCV3及其他常见猪病毒（如PRRSV、CSFV、PRV等）的交叉反应。
重复性与稳定性
试纸条在不同批次间的重复性良好，且在室温干燥状态下可稳定保存12个月，检测性能未发生显著变化。
本研究成功开发了一种基于金纳米颗粒的免疫层析试纸条，用于快速检测PCV2病毒颗粒或Cap蛋白。该试纸条具有高灵敏度、高特异性、操作简便、检测快速等优点，适用于PCV2疫苗研究中的实时抗原监测。研究为PCV2疫苗的研发和生产提供了一种高效、可靠的检测工具，具有重要的科学和应用价值。
高灵敏度与特异性
试纸条对PCV2的检测灵敏度显著高于传统方法，且无与其他猪病毒的交叉反应。
快速检测
检测结果可在5分钟内通过肉眼观察获得，极大提高了检测效率。
稳定性与重复性
试纸条在室温下可稳定保存12个月，且不同批次间的重复性良好。
应用前景
该试纸条为PCV2疫苗研究提供了一种简便、可靠的检测方法，具有广泛的应用前景。
本研究还探讨了试纸条在PCV2病毒复制和Cap蛋白纯化过程中的应用潜力，能够有效监测抗原含量，避免不必要的下游操作。未来研究将进一步探索新型标记纳米材料，以提高试纸条的灵敏度，扩展其在PCV2临床感染监测中的应用。
本研究为PCV2抗原检测提供了一种高效、可靠的解决方案，具有重要的科学意义和应用价值。