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酶辅助代谢涂层双金属硅藻纳米二氧化硅作为表面增强拉曼散射基底用于前列腺癌特异性筛查

期刊:ACS Applied Nano Materials

这篇文档属于类型a,即报告了一项原创性研究。以下是对该研究的学术报告:


作者与机构
本研究的主要作者包括Muhammad Ibrar、Tao Wang、Yanqing Luo、Yajun Ruan、Shiqinq Zhu、Yue Wu、Shuangfei Li、Ming Ying和Xuewei Yang。他们分别来自深圳大学海洋藻类生物工程广东省技术研究中心、华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科等机构。该研究发表于ACS Applied Nano Materials期刊,发表日期为2023年10月11日。

学术背景
本研究属于纳米材料与生物传感交叉领域,聚焦于开发一种基于硅藻(diatom)的生物纳米系统,用于前列腺癌(prostate cancer, PCA)早期标志物肌氨酸(sarcosine)的高灵敏度检测。前列腺癌是全球男性常见的恶性肿瘤之一,早期诊断对提高治愈率至关重要。肌氨酸作为一种尿液中的代谢标志物,在前列腺癌早期阶段显著升高,但其检测面临灵敏度低、特异性差等挑战。
传统的表面增强拉曼散射(surface-enhanced Raman scattering, SERS)基底存在热点(hotspots)分布不均、催化效率低等问题。本研究提出了一种基于硅藻壳(frustule)的光子晶体与双金属纳米颗粒(bimetallic nanoparticles, BINPs)结合的纳米系统,通过酶辅助代谢涂层技术实现肌氨酸的高效检测。研究的主要目标是开发一种非侵入性、高灵敏度的生物传感平台,用于前列腺癌的早期筛查。

研究流程
研究分为以下几个主要步骤:
1. 硅藻培养与双金属纳米颗粒的代谢插入
以硅藻Thalassiosira pseudonana为研究对象,采用两阶段培养法在其壳上涂覆金/铜双金属纳米颗粒(Au/Cux)。第一阶段将氯金酸(HAuCl4)和硅酸钠加入培养基中,培养3天;第二阶段将铜前驱体加入培养基,直至培养基颜色变为深棕色。通过紫外-可见光谱(UV-Vis)监测纳米颗粒的合成。
2. 硅藻壳的表征
使用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱(XPS)等技术对涂覆前后的硅藻壳进行形貌和化学组成分析。结果表明,双金属纳米颗粒均匀分布在硅藻壳表面,形成了高密度的热点。
3. 肌氨酸氧化酶的固定化
设计了一种基于硅藻亲和肽(silaffin peptide)的肌氨酸氧化酶(sarcosine oxidase, SOX)固定化方法。通过基因工程将SOX与亲和肽融合表达,并将其固定在双金属涂覆的硅藻壳上。
4. 纳米系统的催化性能测试
以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)为底物,测试双金属涂覆硅藻壳的过氧化物酶活性。结果表明,Au/Cux涂覆的硅藻壳催化效率显著高于单一金属涂覆的硅藻壳和悬浮的双金属纳米颗粒。
5. 肌氨酸的检测
通过级联反应检测肌氨酸:SOX催化肌氨酸生成过氧化氢(H2O2),H2O2作为底物被双金属纳米颗粒催化氧化TMB,生成蓝色产物。利用紫外-可见光谱和拉曼光谱检测反应产物,建立肌氨酸浓度与信号强度的线性关系。
6. 实际尿液样本的检测
将纳米系统应用于前列腺癌患者和健康个体的尿液样本中,检测肌氨酸浓度。结果表明,前列腺癌患者的肌氨酸浓度显著高于健康个体,验证了纳米系统的临床应用潜力。

主要结果
1. 硅藻壳与双金属纳米颗粒的表征
SEM和TEM结果显示,双金属纳米颗粒均匀分布在硅藻壳表面,形成了高密度的热点。XPS分析证实了Au和Cux的存在,且Cu以氧化态为主,具有更高的催化活性。
2. 催化性能测试
Au/Cux涂覆的硅藻壳催化效率比单一金属涂覆的硅藻壳提高了12.37倍,比悬浮的双金属纳米颗粒提高了3.25倍。
3. 肌氨酸检测
纳米系统在肌氨酸浓度为10^-8 M至10^-5 M范围内表现出线性响应,检测限低至10^-8 M。
4. 实际样本检测
在前列腺癌患者的尿液样本中,肌氨酸平均浓度约为15 μM,显著高于健康个体的2.2 μM。纳米系统的特异性为79%,灵敏度为92%。

结论
本研究成功开发了一种基于硅藻壳的双金属纳米系统,用于前列腺癌早期标志物肌氨酸的高灵敏度检测。该纳米系统结合了光子晶体与等离子体共振的双重增强机制,显著提高了检测灵敏度和催化效率。研究结果表明,该系统具有较高的临床应用潜力,为非侵入性前列腺癌筛查提供了新方法。

研究亮点
1. 创新性方法
首次利用活体硅藻代谢插入双金属纳米颗粒,开发了一种新型的生物纳米系统。
2. 高灵敏度检测
通过光子晶体与等离子体共振的耦合,实现了肌氨酸的超低浓度检测(10^-8 M)。
3. 实际应用价值
纳米系统在前列腺癌患者尿液样本中表现出高特异性和灵敏度,具有显著的临床应用前景。

其他有价值的内容
本研究还验证了纳米系统的稳定性和可重复性。长期储存后,纳米系统的催化活性未发生显著变化,表明其具有良好的稳定性。此外,纳米系统的制备过程简单、成本低,适合大规模生产。


这篇报告详细介绍了研究的背景、流程、结果和意义,为相关领域的研究者提供了全面的参考。

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