光漂白对活体秀丽隐杆线虫幼虫线粒体定量、时空超分辨率成像的影响

学术背景与问题提出 线粒体作为真核细胞中至关重要的细胞器,参与了细胞的能量代谢、信号传导以及细胞生存与死亡的调控。线粒体功能障碍与多种人类疾病相关,包括神经退行性疾病、心血管疾病、糖尿病和癌症等。因此,研究线粒体的动态变化对于理解其生物学功能及其在疾病中的作用具有重要意义。然而,传统的电子显微镜(EM)虽然具有极高的空间分辨率,但只能用于固定样本,无法捕捉线粒体的动态变化。荧光显微镜虽然可以用于活体样本的观察,但其分辨率有限,尤其是在三维(3D)重建和长时间成像中,光漂白(photobleaching)问题严重影响了定量分析的准确性。 光漂白是指荧光分子在光照下发生不可逆的化学变化,导致荧光信号逐渐减弱的现象。这一问题在长时间成像中尤为突出,限制了线粒体等细胞器的动态研究。尽管已有多种方法试...

共聚焦扫描光场显微镜的长期活体亚细胞成像

共聚焦扫描光场显微镜的长期活体亚细胞成像

长期活体亚细胞成像的突破:共聚焦扫描光场显微镜技术研究 研究背景 活体长期细胞动态观测在研究如免疫反应及大脑功能等生理病理过程中不可或缺,要求高时空分辨率以及低光毒性。已有共焦显微技术通过光学切片排除背景荧光,并提高信噪比,然而难以在并行化处理、分辨率和光毒性间取得平衡。光场显微镜虽然提升了并行化处理且光毒性低,但在排除背景方面却存在不足。 “共聚焦扫描光场显微镜(Confocal Scanning Light-Field Microscopy, CSLFM)”采用轴向延长的线性共焦照明和滚动快门,进一步提升了三维(3D)成像质量、速度和低光毒性。研究中,CSLFM 达到了与双光子显微镜类似的定向选择性,有助于解码神经机制,并可在光学挑战的环境下观察亚细胞动态。 本文将详细阐释该研究的全流程...