由DNA或RNA靶标结合激活的Cas9转核酸酶活性

在本研究中,我们证明了另一类2型CRISPR-Cas系统——II型Cas9系统,也具备“trans-cleavage”活性,该活性由crRNA和tracrRNA指导并通过DNA或RNA目标的结合而激活。通过将Cas9效应核酸酶的trans-cleavage活性与核酸扩增技术结合,我们创建了名为DACD和RACD的特异性DNA和RNA样本检测平台。 Cas9在chimeric sgRNA和nonchimeric crRNA与tracrRNA的指导下,显示出显著不同的ssDNA trans-cleavage活性。酶动力学分析表明,在crRNA和tracrRNA指导下的Cas9 trans-cleavage的催化效率远高于chimeric sgRNA指导下的Cas9 trans-cleavage。...