Ciblage sélectif de la calréticuline mutée par l'anticorps monoclonal INCA033989 inhibe la fonction oncogénique des néoplasmes myéloprolifératifs

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Rapport sur l’utilisation de l’anticorps monoclonal INCA033989 pour le ciblage des calr mutés dans le traitement des néoplasies myéloïdes

Contexte : Les mutations de la calréticuline, un moteur des néoplasmes myéloprolifératifs

Les néoplasmes myéloprolifératifs (MPN en anglais) désignent un ensemble de pathologies malignes affectant les cellules souches hématopoïétiques (HSC). Ces pathologies sont principalement causées par des mutations somatiques touchant les gènes JAK2, CALR (calréticuline) et MPL. Parmi ces mutations, les mutations CALR (mutCALR) représentent le deuxième moteur pathogène le plus courant, responsables de 35 % des cas de myélofibrose primaire (MF) et de 25 % des cas de thrombocythémie essentielle (ET). Ces mutations sont associées à une expansion clonale accrue, un risque de thrombose et la progression vers la fibrose médullaire.

Cependant, les traitements actuels comme les inhibiteurs de JAK (par ex. ruxolitinib) se concentrent principalement sur la gestion des symptômes (ex. réduction de la taille de la rate) et n’offrent pas la possibilité de réduire significativement le fardeau des mutations clonales. Faute de pouvoir éliminer les facteurs pathogènes, ces thérapies ne permettent ni de guérir ni de modifier durablement l’évolution de la maladie. Le besoin de thérapies ciblées, spécifiquement dirigées contre mutCALR, est donc une priorité dans ce domaine.

Face à ce défi, des chercheurs de l’Incyte Research Institute, en collaboration avec Gustave Roussy et l’Université Paris-Saclay, ont développé l’anticorps monoclonal INCA033989 pour cibler spécifiquement mutCALR. Cet anticorps a été évalué pour sa capacité à inhiber les fonctions oncogéniques associées au complexe CALR-mpl et ses effets sur les modèles cellulaires et animaux.

Design de l’étude et méthodologie

Présentation générale

Les chercheurs visent à démontrer le potentiel thérapeutique d’INCA033989 à travers plusieurs étapes : 1. Sélection et caractérisation d’anticorps : Identification d’anticorps dotés d’une forte affinité pour mutCALR. 2. Expérimentation in vitro : Analyse des propriétés de liaison et des effets fonctionnels sur des lignées cellulaires modifiées. 3. Validation in vivo : Évaluation dans un modèle murin reproduisant les néoplasmes myéloprolifératifs (MPN).

Sélection et affinité de l’anticorps

Les caractéristiques cinétiques d’INCA033989 ont été analysées par résonance plasmonique de surface (SPR). L’anticorps présente une forte affinité pour CALRdel52 (Kd de 1,75 nM) et une affinité légèrement inférieure pour CALRins5 (Kd de 6,78 nM). Sans surprise, INCA033989 n’a montré aucune interaction avec la calréticuline de type sauvage (wtCALR). Cela confirme la spécificité de l’anticorps envers les nouvelles néo-épitopes générées par mutCALR.

Validations in vitro

Des lignées cellulaires (Ba/F3 et UT-7) co-exprimant mutCALR et mpl (le récepteur à la thrombopoïétine, TpoR) ont été utilisées pour évaluer les effets thérapeutiques d’INCA033989 en termes de : - Inhibition des voies JAK/STAT : INCA033989 inhibe les signaux oncogéniques en chemine dose-dépendante, bloquant efficacement la phosphorylation des marqueurs STAT5, STAT3, et autres kinases. - Effets spécifiques : L’anticorps cause la mort programmée des cellules portant mutCALR, mais n’avait aucun effet sur les cellules présentant d’autres mutations (ex. JAK2V617F) ou aucun défaut sous-jacent.

Par ailleurs, des cellules CD34+ dérivées de patients atteints de MF ont été soumises à des tests ex vivo, révélant qu’INCA033989 : - Bloque la différenciation pathologique des progéniteurs vers les mégacaryocytes ; - Épargne les cellules saines tout en éliminant sélectivement les cellules mutantes exprimant mutCALR.

Modèle murin compétitif

Dans un modèle murin de transplantation compétitive, des cellules souches exprimant CALRdel52 ont été greffées aux côtés de cellules sauvages. Les résultats démontrent que le traitement à l’anticorps : - Empêche le développement de la thrombocytose et la prolifération des mégacaryocytes ; - Réduit significativement la population de cellules souches hématopoïétiques long-terme (LT-HSCs) mutées.

Résultats clés et mécanisme

Observations principales

  1. Mode d’action : INCA033989 se lie au complexe mutCALR-TpoR et en favorise l’internalisation via une voie dépendante de la dynamine, menant à sa dégradation lysosomale.
  2. Sélectivité : L’anticorps agit exclusivement sur les cellules exprimant mutCALR, épargnant les cellules normales, même lors d’utilisation prolongée.
  3. Propriétés curatives potentielles : En ciblant spécifiquement LT-HSCs mutées dans la moelle osseuse, INCA033989 peut freiner à la fois l’initiation et l’entretien de la maladie.

Originalité scientifique

  • Premier médicament ciblant spécifiquement le mutCALR : INCA033989 établit un précédent pour les traitements dirigés contre ce néo-antigène.
  • Effet sélectif : Contrairement aux traitements standards (ex. hydroxyurée), l’anticorps interfère directement avec les mécanismes moléculaires sous-jacents.
  • Utilisation sans activation immunitaire : Grâce à des modifications dans son domaine Fc, INCA033989 n’entraîne pas de cytotoxicité dépendante des anticorps (CDC ou ADCC), évitant ainsi les effets secondaires immunitaires.

Perspectives et implications cliniques

Développements futurs

Le traitement MPN représente une opportunité pour une exploitation clinique optimale d’INCA033989, en particulier dans : - La thrombocythémie essentielle (ET) : Réduction de la prolifération clonale anormale et prévention de la progression vers la MF. - La myélofibrose (MF) : Amélioration des résultats cliniques, potentiellement en combinaison avec les inhibiteurs de JAK.

Un essai de phase 1 est déjà lancé pour évaluer l’innocuité, la pharmacocinétique et l’efficacité clinique initiale chez des patients porteurs de mutCALR.

Questions ouvertes

  • INCA033989 peut-il montrer des effets suffisants comme monothérapie dans les cas avancés avec fibrose importante ?
  • Quels seront les impacts à long terme, notamment concernant la remission profonde et l’éradication du clone muté ?

Conclusion

INCA033989 représente une percée dans les thérapies des néoplasmes myéloprolifératifs liés à mutCALR, avec un potentiel non négligeable pour modifier durablement le cours de la maladie. Ce médicament pourrait devenir un modèle pour d’autres approches axées sur les mutations dans les cancers hématologiques.